清肺排毒汤促进巨核细胞分化和血小板生成的作用研究

目的:考察清肺排毒汤(Qingfei Paidu Decoction,QFPDD)对巨核细胞分化和血小板生成的影响.方法:以人源巨核细胞DAMI细胞株为研究对象.制备QFPDD水煎液.①将DAMI细胞分为QFPDD不同浓度(0、25、50、75 mg/L)组,分别给予相应浓度的药物干预.药物作用48 h后,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞DNA含量,PCR检测转录因子aNF-E2 、fNF-E2、GATA-1和Fli-1的mRNA表达水平.②将细胞分为对照组和QFPDD不同浓度(25、50、75 mg/L)组,各组均给予1μmol/L PMA和10 ng/ml TPO以诱导细胞分化,连续7d;同时,QFPDD组给予相应浓度药液干预.干预7d后,在无药物和诱导剂刺激条件下继续培养3d,收集细胞和上清液.流式细胞仪检测细胞DNA含量、血小板样颗粒数目,并进行巨核细胞形态分析.结果:①不同浓度的QFPDD干预对未分化的DAMI细胞的增殖无明显影响.50、75 mg/L QFPDD干预能够诱导未分化的DAMI细胞进入G2/M期,使DNA含量为4N的细胞占比显著增加(P＜0.01).②QFPDD干预可使诱导分化的DAMI细胞的DNA倍性显著增加,QFPDD 25、50、75 mg/L组中DNA倍性≥8N的细胞占比明显高于对照组(P＜0.05,P＜0.01),且各浓度组具有产生前血小板颗粒能力的细胞数量明显多于对照组(P＜0.01),各浓度组细胞培养基中血小板样颗粒数目均显著高于对照组(P＜0.01).③QFPDD 75 mg/L组转录因子fNF-E2、GATA-1和Fli-1的mRNA表达量较对照组显著升高(P＜0.01),50 mg/L组Fli-1 mRNA表达量亦显著升高(P＜0.01),但各浓度QFPDD作用对aNF-E2 mRNA表达均无明显影响.结论:QFPDD能够促进DAMI细胞的分化和多倍体化,促进血小板样颗粒的生成,其作用机制可能与上调转录因子fNF-E2、GATA-1和Fli-1的表达相关.