朱茯苓水提物对小鼠的催眠作用和分子机制研究

目的:研究朱茯苓对小鼠的催眠作用和对小鼠海马神经元细胞的影响,从分子层面探讨其催眠机制.方法:ICR小鼠随机分为正常对照组、艾司唑仑0.1 mg/kg组、朱茯苓水提物1.1、2.3、4.5 g/kg组,连续灌胃给药7 d后,分别观察小鼠自主活动次数;阈下剂量戊巴比妥钠所致小鼠入睡率;阈剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的测定,取小鼠海马组织,以酶联免疫吸附法测定(ELISA)法测定睡眠相关因子γ-氨基丁酸(GABA)和5-羟色胺(5-HT)的含量.体外培养小鼠海马神经元HT22细胞,采用CCK-8法检测细胞活性,优选合适的朱茯苓水提物和艾司唑仑浓度用于后续实验.将小鼠海马神经元细胞随机分为为空白对照组、艾司唑仑20 μg/mL组、朱茯苓水提物80、160、320 μg/mL组,给药24 h后采用流式细胞术分析海马神经元细胞早期凋亡情况,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞内Gaba、5-Ht受体和钟基因mRNA表达情况,采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞内GA-BA、5-HT受体和钟基因蛋白表达情况.结果:小鼠自主活动结果表明,与正常对照组相比,朱茯苓2.3、4.5 g/kg组小鼠自主活动次数显著减少(P＜0.01);朱茯苓水提物4.5 g/kg组小鼠入睡率明显提高(P＜0.05);朱茯苓水提物1.1、2.3、4.5 g/kg组小鼠睡眠潜伏期显著缩短(P＜0.01),睡眠时间显著延长(P＜0.01),朱茯苓水提物2.3、4.5 g/kg组小鼠海马组织GABA和5-HT含量明显提升(P＜0.05或P＜0.01).细胞实验结果表明培养第7 d的小鼠海马神经元细胞更为饱满,光晕变得立体,细胞间网络连接更加紧密,突起进一步增多和增长,生长成熟.与正常对照组比较,朱茯苓水提物80、160、320 μg/mL组细胞早期凋亡率显著降低(P＜0.01),朱茯苓水提物320 μg/mL组GABRA1、GABRA2、5-HT1A、5-HT1B、Cry1、Per1、Per2基因蛋白表达和mRNA表达水平显著上调(P＜0.01).结论:朱茯苓对小鼠具有一定的催眠作用,可能通过提高海马组织内GABA和5-HT含量、降低小鼠海马神经元细胞的早期凋亡率、调节相应的神经递质受体和钟基因的mRNA和蛋白表达来发挥催眠作用.