半夏泻心汤对小鼠Cajal间质细胞表型维持及相关钙离子通道蛋白的影响

目的 通过观察小鼠胃Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)表型变化及相关蛋白,讨论半夏泻心汤调节胃肠运动的细胞分子机制.方法 制备半夏泻心汤药物血清,以去离子水灌胃所得血清为对照.取对数生长期的ICC,随机分为空白组、对照组、低浓度组(5％半夏泻心汤药物血清)、中浓度组(10％半夏泻心汤药物血清)和高浓度组(20％半夏泻心汤药物血清),分别给予相应药液,于12小时、24小时和48小时后进行指标检测.采用免疫荧光双染法检测ICC标记蛋白c-kit/α-SMA、c-kit/desmin和c-kit/SMMHC表达,镜下观察半夏泻心汤对小鼠ICC表型维持的影响;采用免疫印迹和实时荧光定量PCR法检测ICC中钙离子通道蛋白三磷酸肌醇受体(inositol 1,4,5-triphosphate receptors,IP3R)、兰尼碱受体(ryanodine receptor,RyR)、磷脂酶C(phospholipases C,PLC)及其mRNA的表达.结果 与低浓度和中浓度组相比,高浓度组c-kit阳性表达显著增加(P<0.05),α-SMA阳性表达明显减少(P<0.01),SMMHC表达和desmin表达差异不显著(P>0.05).与药物干预24小时、48小时组相比,12小时组c-kit阳性表达显著增加(P<0.05);与48小时组相比,12小时组α-SMA阳性表达明显降低(P<0.05);与24小时相比,12小时组α-SMA、desmin和SMMHC平均灰度值无明显差异(P>0.05).与空白组、对照组比,药物组IP3R、RyR、PLC蛋白及mRNA表达均明显升高(P<0.05).结论 20％半夏泻心汤药物血清干预12小时能显著增强ICC表型的维持,加强c-kit表达,其机制可能与调节钙库受体蛋白IP3R、RyR、PLC表达水平,进而影响相关离子通道蛋白有关.