抗耐药结核病新药吡法齐明通过醌氧化还原酶介导发挥作用的机制研究

目的 对吡法齐明(pyrifazimine,TBI-166)通过醌氧化还原酶(quinone oxidoreductase,QOR)介导累积活性氧(reactive oxygen species,ROS)发挥抗结核作用的机制进行探索.方法 表达、纯化MtbQOR蛋白,设置空白对照组及加TBI-166(0.03、0.3、3 μg/ml)组,酶标仪监测波长340 nm处吸光度(A340)下NADPH的下降程度(△A);应用辅酶Ⅱ NADP(H)含量检测试剂盒检测不同浓度TBI-166作用H37Rv菌体后NADPH/NADP+的比值;应用细菌活性氧检测试剂盒检测结核分枝杆菌H37Rv标准株和临床分离株菌体内ROS荧光值.结果 空白对照组 △A(0.316±0.032)较0.03、0.3、3 μg/ml TBI-166组(0.506±0.107、0.531±0.054、0.801±0.079)明显降低,差异有统计学意义(t=-3.799,P＜0.05;t=-7.634,P＜0.01;t=-12.683,P＜0.01).在48 h 内,加TBI-166组 NADPH/NADP+比值(0.847±0.229)低于空白对照组比值(1.728±0.384).H37Rv 菌株中,TBI-166刺激组ROS荧光值(23 072±2584)明显高于空白对照组(8282±448),差异有统计学意义(F=33.334,P＜0.01).在菌株号为12897菌株中,TBI-166刺激组ROS荧光值(18 369±3118)明显高于空白对照组(12 268±2735),差异有统计学意义(F=5.026,P＜0.05);在菌株号为15171菌株中,3μg/ml TBI-166刺激组ROS荧光值(17 572±249)明显高于空白对照组(11 109±343),差异有统计学意义(F=122.601,P＜0.01);在菌株号为11492及11195菌株中,TBI-166刺激组与空白对照组ROS荧光值差异无统计学意义(F=161.440,P＞0.05;F=44.788,P＞0.05).结论 TBI-166可以通过增加MtbQOR介导的氧化还原反应,降低NADPH/NADP+的比值,刺激菌体累积ROS发挥抗结核作用.