新型冠状病毒RT-LAMP检测方法的建立

目的 建立基于逆转录环介导恒温扩增技术(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)的新型冠状病毒(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS-CoV-2)快速检测方法.方法 针对SARS-CoV-2的ORF1ab和N基因序列保守区,设计引物,优化RT-LAMP检测体系,评价其检测特异性和灵敏度.结果 成功建立了检测SARS-CoV-2的可视化RT-LAMP(Visual RT-LAMP,V-RT-LAMP)和实时荧光RT-LAMP(Real-time fluorescence RT-LAMP,RF-RT-LAMP)方法,经检测人工合成靶位基因RNA样品和各种实际核酸样品,其结果均与实际结果相符;V-RT-LAMP和RF-RT-LAMP方法的最低检出限均可达到10拷贝数,与实时荧光逆转录聚合酶链反应(quantatitive Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)方法相一致.结论 V-RT-LAMP和RF-RT-LAMP方法其检测特异性好、灵敏度高,适用于SARS-CoV-2的快速检测.