环介导等温扩增联合横向流动试纸条可视化检测HPV16及HPV58方法的建立

目的 将环介导等温扩增技术(LAMP)与横向流动试纸条(LFD)联合应用,建立一种快速、可视化的HPV16、HPV58检测方法.方法 运用LAMP在线引物设计软件,针对HPV16E6基因及HPV58L1基因保守区域设计引物及探针.采用生物素标记LF,荧光基团FAM和淬灭基团BHQ-1标记探针,LFD进行目视检测,建立HPV16和HPV58的LAMP-LFD检测方法,并对其特异性、灵敏度及临床实用性进行验证.将临床样品使用该方法的检测结果与实时LAMP扩增及qPCR结果相比较,计算符合率.结果 优化的LAMP最佳反应温度为63℃,最佳反应时间为50 min.LFD检测仅需5 min,故完成检测耗时仅55 min;建立的LAMP-LFD方法能特异性检出HPV16、HPV58,其他5种常见高危型HPV呈阴性反应;该方法针对HPV16和HPV58的检测灵敏度均为100拷贝/μl,50份临床样品检测结果与实时LAMP和qPCR检测的符合率达100％.结论 建立的HPV16、HPV58 LAMP LFD检测体系快速、简便,可视化.该方法对设备的要求低,仅需恒温孵育器即可完成,结果易观察,适用于现场HPV检测,以及经济落后和资源匮乏地区的HPV筛查.