悬浮驯化Vero细胞制备及其在大流行流感病毒株培养的初步应用

目的 悬浮驯化培养Vero细胞(Vero simian kidney epithelial,Vero),并用于流感病毒H5N1及H7N9 Vero细胞高产重配株的制备.方法 使用自配的Vero细胞悬浮培养基(Vero cells suspension media 1,VSM-1)在搅拌瓶中驯化贴壁Vero细胞适应悬浮培养,获得可悬浮培养的Vero细胞.使用工作体积5 ml的50 ml离心管为悬浮培养单元,同时设置相同工作体积的单层贴壁Vero 细胞作为对照,以血凝滴度评价流感病毒在悬浮Vero细胞上的复制能力.结果 本实验获得的悬浮Vero细胞在1.78×105细胞/ml的接种密度培养72 h后,细胞密度可达7.45×105细胞/ml.细胞倍增时间缩短在48 h内,比生长速率(μ)在驯化60～80 d后,维持在(0.016±0.007)h-1.悬浮Vero细胞分别接种H5N1和H7N9后,平均血凝滴度分别为587 HAU/50 μl和224 HAU/50μl,均高于贴壁对照组.结论 VSM-1可以成功驯化Vero细胞摆脱贴壁依赖,获得适应悬浮培养的Vero细胞.初步探索悬浮Vero细胞生产大流行流感病毒株的能力,可为发酵工艺规模生产大流行流感病毒株疫苗做铺垫.