基于磁珠捕获和连接的免核酸提取的恒温扩增技术

目的 建立基于磁珠捕获和连接的环介导恒温扩增(CLIP-LAMP)方法体系,以适用于大体积样品处理,为病原体检测提供一种新的技术方法.方法 在NCBI数据库搜索免疫缺陷病毒(HIV)的一段保守序列,使用实验室特有软件根据该保守序列设计相应的捕获探针和检测探针.磁珠表面通过亲和作用偶联寡核苷酸来抓取捕获探针;由于特异性捕获探针的存在使得核酸提取步骤被省略,靶标DNA或RNA直接特异地结合捕获探针;检测探针经过连接步骤后作为最终模板参与荧光定量环介导恒温扩增反应.将此方法用于HIV体外转录(IVT)合成的RNA检测,并且评估方法的灵敏度和特异性.结果 构建的方法体系成功应用于HIV的IVT检测;现阶段可以检测到32 CPs/μL.该方法有可能处理>1 mL的大体积样本,并且可在2 h内完成检测.结论 建立了基于磁珠的CLIP-LAMP技术,为快速、简便地进行大体积病原体检测提供了新的方法和思路.