吡喹酮对日本血吸虫急性感染小鼠肾脏功能损伤的影响

目的 研究日本血吸虫感染急性期小鼠肾脏炎症的发生、发展进程,评价吡喹酮对急性期感染小鼠肾脏功能损伤的治疗效果.方法 取55只C57BL/6J雌性小鼠,随机分为健康对照组(20只)、健康对照给吡喹酮组(5只)、感染组(20只)、感染给吡喹酮组(5只)和吡喹酮杀虫组(5只)等5组,其中后3组每只小鼠均经腹部皮肤感染(14±2)条日本血吸虫尾蚴.感染后第6周开始给予吡喹酮治疗,健康对照给吡喹酮组和感染给吡喹酮组给药剂量为300 mg/kg,每12小时给一次药,连续给药2周;吡喹酮杀虫组给药剂量为250 mg/kg,连续给药3天.健康对照组和感染组小鼠在感染后第1、3、6和8周各剖杀5只,健康对照给吡喹酮组、感染给毗喹酮组和吡喹酮杀虫组在感染后第8周剖杀,收集各组各时间点小鼠的尿样和血样,检测尿蛋白和血清肌酐水平,以评价肾功能变化.取小鼠肾脏,制备病理切片,经HE染色后,观察各组小鼠肾脏组织病理学改变;经F4/80免疫组化染色,观察各组小鼠肾脏中巨噬细胞浸润情况.分别用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和Western blotting检测各组小鼠肾脏炎症相关因子(TNF-α、TGF-β、IL-1β、IL-6)和巨噬细胞趋化因子(CCL2)的mRNA相对转录水平和蛋白表达水平.结果 感染后第1、3、6和8周,感染组小鼠的尿蛋白含量分别为(1.67±0.52)、 (2.17±0.41)、 (3.00±0.89)和(4.00±0.63) g/L,均高于健康对照组小鼠(P＜0.01);感染组小鼠的血清肌酐水平分别为(10.01±1.45)、 (13.00±2.12)、 (14.33±1.21)和(19.00±2.54) μmol/L,均高于健康对照组小鼠(P＞ 0.05或P＜0.01).qRT-PCR检测结果显示,感染组小鼠的炎症因子TNF-α mRNA相对转录水平分别为2.47±0.51、3.14±1.43、1.83±0.31和7.48±5.54,TGF-β mRNA相对转录水平分别为0.94±0.24、2.80±1.07、2.72±0.88和3.03±0.36,IL-1β mRNA相对转录水平分别为1.49±0.28、4.32±1.85、2.08±0.69和2.81±0.73,IL-6 mRNA相对转录水平分别为1.96±0.31、1.48±0.35、2.38±1.17和2.85±1.32,均高于对应时间点的健康对照组小鼠(P＜ 0.05或P＜0.01).Western blotting分析结果显示,感染组小鼠的TNF-α和IL-1β蛋白表达水平均较健康对照组升高.感染组小鼠的巨噬细胞趋化因子CCL2 mRNA相对转录水平为1.84±0.17、3.42±0.85、3.03±1.00和2.63±0.43,均高于健康对照组小鼠(P＜0.01).肾脏病理切片HE染色结果显示,感染组小鼠肾脏组织中大量炎性细胞浸润,肾小球增大,肾小球系膜细胞增生.免疫组化分析结果显示,感染组小鼠肾脏F4/80阳性区域面积为(1.99±0.49)％、 (4.27±0.90)％、 (6.71±1.38)％和(9.83±1.91)％,均高于健康对照组(P＜0.01).经吡喹酮2周疗程治疗后,感染给吡喹酮组小鼠的肾脏组织损伤减轻,肾小球系膜细胞增生缓解.与感染组比较,感染给吡喹酮组小鼠的尿蛋白含量[(2.67±0.52) g/L]减少,血清肌酐水平[(14.17±2.88) μmol/L]下降,F4/80阳性区域面积[(5.92±1.81)％]减少,TGF-β (0.99±0.23)和IL-6(1.24±0.53) mRNA相对转录水平下降(P＜ 0.05或P＜0.01),TNF-α和IL-1β的蛋白表达减少;而吡喹酮杀虫组与感染组比较差异无统计学意义(P＞0.05).与感染组(5.29±2.98、2.81±0.73、2.63±0.43)比较,感染给吡喹酮组(0.98±0.36、0.95±0.33、0.80±0.27)和毗喹酮杀虫组的TNF-α(1.56±0.66)、IL-1β (1.76±0.76)和CCL2 mRNA(1.41±0.48)相对转录水平均下降(P＜ 0.05或P＜0.01).结论 日本血吸虫感染小鼠在感染初期和急性期发生肾脏炎症,肾脏组织中伴有巨噬细胞浸润,肾小球和肾功能损伤.毗喹酮2周疗程治疗可明显改善急性日本血吸虫感染小鼠的肾脏炎症和肾功能.