烟酰胺单核苷酸对Huh7细胞胆固醇代谢调节作用的研究

目的 探讨烟酰胺单核苷酸(NMN)对Huh7细胞胆固醇的调节作用及分子机制.方法 用不同浓度(0、12.5、25、50、100、200 μmol/L) NMN处理Huh7细胞24h,采用细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK-8)检测NMN对细胞活力的影响;油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况;免疫荧光显微镜观察细胞对DiI-LDL的摄取能力;实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测细胞内肝细胞核因子1α[(HNF1α)、前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)、低密度脂蛋白受体(LDLR)的mRNA和蛋白表达情况.结果 CCK-8实验结果显示,不同浓度NMN处理Huh7细胞24h对细胞活力没有显著影响;油红O染色显示,LDL加入后细胞内红色脂滴数量随着NMN浓度增加而增多;免疫荧光显微镜观察结果显示,细胞核周红色荧光随着NMN浓度增加而增强;Western blot和qRT-PCR结果显示,100、200 μmol/L NMN使Huh7细胞PCSK9、HNF1α mRNA和蛋白的表达显著降低,LDLR mRNA和蛋白的表达明显升高(P＜0.01).结论 NMN可能通过介导HNF1 α/PCSK9/LDLR信号通路参与调节Huh7细胞的胆固醇代谢,增强肝细胞对LDL的摄取能力.