巨噬细胞ABCG1介导的氧化固醇外流的研究

目的 测定巨噬细胞ABCG1介导的氧化固醇外流情况.方法 利用ABCG1基因小干扰RNA慢病毒表达载体感染THP-1细胞,经有限稀释法筛选出敲低单克隆稳转株;用PMA诱导THP-1为巨噬细胞,ox-LDL(50μg/ml)刺激24 h后,通过液相色谱串联质谱测定细胞氧化固醇7β-羟基胆固醇(7β-OHC)和7-酮基胆固醇(7-KC)外流情况.结果 对待测样品进行了氧化固醇定性与定量分析,发现与无外流接受体的空白对照组相比,诱导氧化型胆固醇外流率增加(7-KC:28.6％±2.3％比4.1％±0.7％,P<0.001;7β-OHC:35.5％±5.7％比3.7％±1.1％,P<0.001).与阴性对照组相比,ABCG1敲低组氧化型胆固醇的外流率降低(7-KC:16.1％±3.1％比24.7％±2.3％,P<0.05;7β-OHC:15.7％±0.7％比33.1％±3.7％,P<0.001).胞内氧化固醇沉积量通过细胞总蛋白进行校正,结果显示,与对照组比较,ABCG1低表达巨噬细胞胞内氧化固醇沉积增加[7-KC:(6.61±1.28)μg/mg比(2.13±0.08)μg/mg,P<0.05;7β-OHC:(1.61±0.51)μg/mg比(0.65±0.20)μg/mg,P<0.05].结论 巨噬细胞ABCG1低表达可抑制氧化固醇7β-OHC及7-KC外流,增加胞内氧化固醇沉积.