雌激素通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号转导途径对钙诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响

目的 研究雌激素对血管平滑肌细胞钙化的影响及机制.方法 体外培养大鼠胸大动脉平滑肌细胞(A7r5),按CaCl2溶液不同时间和浓度梯度进行钙化模型建立.细胞随机分为正常对照组、钙化组、雌激素干预(钙化+雌激素)组、雌激素溶剂对照(钙化+Eth)组、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号转导通路拮抗剂干预(钙化+LY294002)组.对不同处理组细胞采用茜素红染色检测钙化结节,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞钙离子浓度及碱性磷酸酶(alkaline phospha?tase,ALP)活性;实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测Runx2的mRNA浓度,Western blot检测Runx2及磷酸化(phosphate,p)-Akt的表达水平.结果 与正常对照组相比,钙化组A7r5细胞的茜素红染色钙化结节、钙离子浓度、ALP活性、Runx2的mRNA浓度和Runx2、P-Akt蛋白浓度明显升高,差异有统计学意义(P<0.01).与钙化组A7r5细胞相比,雌激素干预后明显抑制A7r5细胞钙化(P<0.01),并降低Runx2、P-Akt蛋白浓度,差异有统计学意义(P<0.05).结论 雌激素可通过抑制A7r5细胞钙化过程中PI3K/Akt信号通路及下游的Runx2表达,从而抑制细胞钙化.