结直肠癌组织和细胞株PITRM1-AS1和PITRM1表达研究

目的 探讨加溶金属蛋白酶1(PITRM1)反义长链非编码RNA PITRM1-AS1和PITRM1在结直肠癌组织表达的临床意义及其与细胞恶性表型的关系.方法 选取2016-06-01-2019-09-30南昌大学第二附属医院90例结直肠癌患者肿瘤组织及正常癌旁组织,提取组织总RNA;体外培养人正常结肠上皮细胞系HcoEpiC和人结直肠癌细胞系SW480、SW620、HT29及HCT116.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织及细胞中PITRM1-AS1和PITRM1表达水平,χ2检验分析两者表达与患者临床资料的关系.采用慢病毒介导的细胞转染技术在SW620细胞中转染过表达PITRM1-AS1(实验A组)及对照载体(对照A组),在HCT116细胞中转染过表达PITRM1(实验B组)及对照载体(对照B组);细胞计数盒8(CCK8)实验检测细胞增殖能力;Transwell侵袭及迁移实验检测细胞侵袭和转移能力;蛋白质印迹法检测PITRM1表达变化.结果 正常癌旁及结直肠癌组织PITRM1-AS1表达分别为0.025±0.003和0.011±0.001,PITRM1的表达分别为0.070±0.017和0.145±0.039,PITRM1-AS1表达在结直肠癌组织中显著降低(t=5.387,P<0.01),PITRM1 mRNA表达在结直肠癌组织中显著增高(t=3.971,P<0.01),PITRM1-AS1的低表达及PITRM1的高表达与结直肠癌患者淋巴结转移(χ2=17.857,P<0.01)和Duke分期相关,χ2=7.756,P<0.01.与对照A组比较,实验A组细胞PITRM1-AS1表达显著增高(t=35.72,P<0.01),PITRM1 mRNA(t=23.70,P<0.01)及蛋白(t=32.25,P<0.01)表达均下调;与对照B组比较,实验B组细胞PITRM1-AS1表达无显著变化(t=1.565,P>0.05),PITRM1 mRNA(t=62.01,P<0.01)及蛋白(t=48.89,P<0.01)表达均显著增高.与对照A组比较,实验A组细胞在48～96 h时增殖能力降低;与对照B组比较,实验B组细胞在72～96 h时增殖能力增高.对照A组侵袭及迁移细胞数分别为(141.6±22.7)和(172.5±15.9)个,实验A组分别为(58.0±8.4)和(62.6±5.7)个,实验A组均低于对照A组,差异均有统计学意义,P<0.01.对照B组侵袭及迁移细胞数分别为(77.9±6.9)和(58.3±7.4)个,实验B组分别为(107.5±9.0)和(92.4±7.8)个,实验B组均高于对照B组,差异均有统计学意义,P<0.01.结论 PITRM1-AS1低表达和PITRM1高表达与结直肠癌患者进展及预后不良相关,PITRM1-AS1在体外可负调控PITRM1并抑制细胞恶性表型.