泛素编辑蛋白A20对呼吸机相关性肺炎患者单核细胞活性的影响

目的:观察并分析泛素编辑蛋白A20对呼吸机相关性肺炎（ventilator associated pneumonia, VAP）患者单核细胞活性的影响。方法:入选2019年2月至9月在郑州大学第一附属医院诊断为VAP的患者24例（VAP组）和健康对照12例（对照组）。分离VAP组外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMCs）、感染部位和非感染部位的支气管肺泡灌洗液（bronchial alveolar lavage fluid, BALF）及对照组PBMCs，检测CD14 +单核细胞中A20水平。纯化VAP患者CD14 +单核细胞和CD4 +T细胞，使用A20 siRNA转染CD14 +单核细胞。转染的CD14 +单核细胞与自体CD4 +T细胞直接/间接接触共培养，检测CD4 +T细胞分泌干扰素-γ（interferon-γ, IFN-γ）和白细胞介素-17（interleukin-17, IL-17）水平。转染的CD14 +单核与NCI-H889细胞直接/间接共培养，检测细胞毒性、分泌细胞因子、颗粒酶B水平及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand, TRAIL）、FasL配体（Fas ligand, FasL）水平。组间比较采用成组 t检验或SNK- q检验。 结果:VAP组外周血CD14 +A20 +细胞比例高于对照组[（62.61±15.33）% vs. （47.13±11.82）， P<0.05]，A20平均荧光强度（mean fluorescence intensity, MFI）亦高于对照组[（227.9±64.18） vs.（178.2±58.62）， P<0.05]。VAP组感染部位BALF中的CD14 +A20 +细胞比例高于未感染部位[（66.14±19.62）% vs. （52.52±13.71）%， P<0.05]，A20 MFI亦高于未感染部位[（268.0±72.56) vs. (197.4±60.01)， P<0.05]。A20 siRNA转染的VAP患者外周血和BALF中的CD14 +单核细胞与自体CD4 +T细胞直接接触共培养后，CD4 +T细胞分泌IFN-γ和IL-17的细胞比例均高于未转染和siRNA转染（ P<0.05），但间接接触共培养中，CD4 +IFN-γ +和CD4 +IL-17 +细胞比例在未转染、对照siRNA转染和A20 siRNA转染中的差异无统计学意义（ P>0.05）。A20 siRNA转染的VAP患者外周血和BALF中的CD14 +单核细胞与NCI-H889细胞直接/间接接触共培养后，靶细胞死亡比例均高于未转染和siRNA转染（ P<0.05），肿瘤坏死因子-α、IL-6、颗粒酶B水平及TRAIL MFI亦高于未转染和siRNA转染（ P<0.05），但靶细胞死亡比例在直接接触和间接接触共培养之间的差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:VAP患者单核细胞中A20水平升高，可能发挥抑制单核细胞活性的作用。