基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路研究右美托咪定对肝癌切除术大鼠免疫功能的影响

[目的]基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨右美托咪定对肝癌切除术大鼠免疫功能的影响.[方法]采用肝包膜下植入肝癌组织建立大鼠原位肝癌模型,并以随机数字表法将24只原位肝癌SD大鼠分为对照组(C组)和右美托咪定低、中、高剂量组(DL组、DM组、DH组),每组6只大鼠.右美托咪定组大鼠于麻醉诱导前15min内静脉输注右美托咪定,麻醉诱导插管后,持续静脉输注右美托咪定至实验结束,对照组则静脉输注等量生理盐水.各组分别于术前(T0)、术后2d(T1)和术后5d(T2)采集尾静脉血.采用流式细胞仪测定T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+水平,计算CD4+/CD8+;采用ELISA法检测血浆白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17A(IL-17A)及干扰素-γ(IFN-γ)的浓度;T2取血后,处死大鼠,观察脾组织病理变化,并运用Western blot检测脾组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达.[结果]在T1和T2时,DH组CD3+、CD4+T细胞数量均比C组显著提高(T1:45.80±8.95 vs 26.03±8.45,P＜0.05;19.73±3.23vs10.00±2.95,P＜0.01;T2:45.70±5.41 vs 23.77±5.98,15.30±3.15vs8.73±2.80,P均＜0.05),CD8+T细胞数量则降低,但无显著差异(P＞0.05).IL-2、IL-17A和IFN-γ水平显著提高(T1:53.72±1.32 vs 51.89±1.19,P＜0.05;225.16±2.46 vs 216.80±2.77,P＜0.01;1556.02±20.72 vs 1528.55±19.77,P＜0.05;T2;53.30±1.35vs49.93±1.28,P＜0.01;223.57±2.55 vs 211.42±2.61,P＜0.01;1553.81±21.24 vs 1524.72±15.65,P＜0.05),IL-10水平降低(T1:145.56±1.50 vs 155.36±1.19;T2:148.51±1.39 vs 166.26±2.12,P均＜0.01).与T0时比较,各组在T1、T2时CD3+、CD4+T细胞数量均降低,CD4+/CD8+升高,CD8+T细胞数量升高.T2时,C组和DL组的IL-2、IL-17A水平均显著降低(C组:49.93±1.28 vs 56.02±0.98,211.42±2.61 vs 226.77±2.59,P均＜0.01;DL组:50.77±0.83 vs 55.02±1.13,P＜0.01;219.67±2.03vs 225.82±2.64,P＜0.05),IL-10水平显著升高(166.26±2.12 vs 146.28±1.50,155.40±1.57 vs 143.59±1.19,P均＜0.01),各组在T1、T2时IFN-γ水平无显著变化.病理结果显示,与C组相比,右美托咪定组脾脏中成熟淋巴细胞数量增加,白髓面积相对扩大.Western blot结果显示,右美托咪定呈剂量依赖性显著下调TLR4、MyD88和NF-κB p65的表达.[结论]右美托咪定可改善原位肝癌切除术大鼠术后细胞免疫功能抑制,可能是通过阻碍TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的激活而发挥免疫调节作用.