月季酵母双杂交cDNA文库的构建及RhRD22互作蛋白的筛选

月季(Rosahy brida)是全球重要的观赏植物,其生长发育和生产质量严重受到干旱胁迫的制约.在已有月季转录组数据的基础上,干旱胁迫可以诱导干旱响应基因RD22(dehydration-responsive gene RD22)的表达.为了进一步探究RhRD22参与干旱胁迫的分子机制,本研究利用改良的SMART(Switching Mechanism At 5'end of RNA Transcript)技术构建月季干旱胁迫酵母双杂交cDNA文库,并利用酵母双杂交技术筛选与RhRD22相互作用的未知潜在蛋白.结果表明:成功构建了高质量月季酵母双杂交cDNA文库,该文库库容为3x106cfu;插入cDNA片段的长度分布在400～2 000 bp,平均长度大于1 000 bp;重组率约为100％.此外,利用重组诱饵蛋白pGBKT7-RhRD22在该文库中筛选了 7个与RhRD22相互作用的蛋白,包括RhEF-Ts、RhDRT100、RhGAPN、RhLDH、RhACLA-3、RhCALS3、RhEOL1.互作蛋白的 GO注释分析表明,RhRD22可能参与蛋白质多肽链的翻译和延伸、DNA修复、代谢反应、乙烯生物合成、蛋白质泛素化、植物防御、应激反应等生物学过程.上述结果为进一步解析RhRD22参与干旱胁迫的分子机制提供了理论参考.