基于长QT综合征的钙调蛋白突变体CaMD130G与心肌钠通道NaV1.5 IQ基序的结合作用

目的 制备并纯化心肌NaV1.5通道IQ蛋白,探讨钙调蛋白?(CaM)?突变体CaMD130G与IQ基序的结合作用,为后续体外实验明确长QT综合征的发病机制奠定基础.方法 采用同源建模和蛋白对接的方法预测突变体CaMD130G与IQ蛋白的结合,利用基因重组技术将重组质粒pGEX-6P-1/GST-IQ转化至原核表达载体大肠杆菌中,并诱导表达该蛋白,通过超声破碎方法提取蛋白并使用GS-4B孵育纯化IQ蛋白,SDS-PAGE确认蛋白的制备效果,Pull-down?assay方法检测CaMD130G与IQ蛋白的结合作用.结果 蛋白对接结果 显示,CaM/CaMD130G和心肌NaV1.5通道IQ蛋白建模成功且具有结合的可能性.SDS-PAGE凝胶电泳结果 显示,制备的心肌NaV1.5通道IQ蛋白浓度和纯度均较高,且与CaMD130G有很好的结合活性.结论 本研究成功制备出浓度和纯度较高的心肌NaV1.5通道的IQ蛋白,并探讨了CaMD130G与心肌NaV1.5通道IQ基序的结合作用.