白粉病菌侵染条件下小麦酵母双杂交文库的构建及可用性检测

为解析白粉病菌侵染小麦以及小麦防御的分子机制,以抗白粉病种质N9134为材料,剪取白粉病菌(Blumeria graminis f.sp.tritici,Bgt)接种48 h后的叶片,提取总RNA,利用SMART技术进行反转录合成双链cDNA(ds-cDNA),并进行均一化处理和SfiI酶切处理,处理后的ds-cDNA分别连接pGADT7-SfiI三框载体,将连接产物转化至感受态细胞HST08中构建文库.通过滴度测定和PCR鉴定其库容量和基因重组率,最后收集细菌并提取质粒.经鉴定,该文库库容量大于1.0×106 cfu·mL-1,插入片段主要分布在400～2 000 bp之间,重组率为100％,冗余度为3％.利用酵母双杂交系统筛选cDNA文库,获得2个与热休克蛋白HSP40-70互作的蛋白质,分别为DnaJ类蛋白(DnaJ-like)和E3泛素蛋白连接酶AIP2(AIP).综上表明,文库构建质量较好,为后续筛选抗逆关键基因奠定了基础.