大豆下胚轴谷丙转氨酶酶学性质分析

大豆是一种重要的固氮农作物,在其种子萌发和初期幼苗生长过程中氨基酸代谢作用较强,表达活性较高的谷丙转氨酶(GPT).为探明大豆下胚轴谷丙转氨酶的蛋白序列和酶学性质,以指导其在基因工程和农业生产中的应用,本研究通过对豆芽下胚轴蛋白组进行液相色谱串联二级质谱分析,确定大豆下胚轴所表达的GPT序列,利用谷氨酸和丙氨酸与茚三酮反应的显色差异测量GPT活力,并探究其酶学性质.结果显示:以茚三酮比色法测得大豆下胚轴谷丙转氨酶在35℃和pH7.0条件下对于丙酮酸的Km值为0.186 mmol·L-1,对于谷氨酸的Km值为1.05 mmol·L-1;Co2+、Mg2+和Ca2+对大豆谷丙转氨酶有激活效应,EDTA2-、尿素、Mn2+和Fe2+有抑制效应;大豆下胚轴谷丙转氨酶具有活性的温度范围为10～60℃,pH范围为4.0～8.0,最适温度为35℃,最适pH7.0.