培养液充气时间对小鼠4细胞胚胎密闭培养效果的影响

[目的]研究标准气充气时间对密闭培养的小鼠4细胞胚胎体外发育的影响,为太空环境下哺乳动物的早期胚胎发育研究奠定基础.[方法]用气体组成为体积分数5％O2、5％CO2、90％N2的高纯标准气对胚胎培养液进行充气处理,充气时间设为30,60,90,120,150,180和240 min,用充气培养液对小鼠4细胞胚胎进行密闭培养,以常规体外微滴培养的胚胎为对照,分别在培养12,36,60,84 h时检测各组体外培养胚胎过氧化物的积累情况和缺氧诱导因子(HIF-1α)表达的变化,并于培养84 h统计囊胚发育率、孵化率和囊胚总细胞数.[结果]当充气时间≥180 min时,胚胎发育早期存在明显的过氧化物积累现象;当充气时间≤120 min时,胚胎发育过程中可以检测到HIF-1α,表明出现缺氧现象.密闭培养条件下,培养液充气120～180 min时的小鼠胚胎囊胚发育率、孵化率和囊胚总细胞数较高,分别为93.38％～95.68％,61.03％～65.27％和102.33～111.83,其中囊胚发育率和囊胚总细胞数与对照组差异不显著(P＞0.05),而囊胚孵化率显著高于对照组(P＜0.05).[结论]小鼠4细胞胚胎密闭培养体系适合的培养液充气方案为:用气体组成比例为体积分数5％O2、5％CO2、90％N2的高纯标准气充气120～150 min,此方案下进行密闭培养的小鼠胚胎可获得较高的发育率,并可有效排除缺氧对早期胚胎体外发育的影响,同时保护胚胎免受过氧损伤.