多形拟杆菌SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立及应用

多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron,B.thetaiotaomicron)是人和动物肠道内的一种常在菌,其在调控糖代谢、调节肠道菌群等方面起重要作用.为建立一种快速、准确检测动物肠道中B.thetaiotaomicron数量的检测方法,本实验参照GenBank中B.thetaiotaomicron标准菌株的保守序列设计合成1对特异性引物.对反应条件进行优化,建立该细菌的SYBR Green荧光定量PCR检测方法.经特异性、敏感性和重复性试验结果显示,在常见的8种肠道细菌中,只能检测到B.thetaiotaomicron,最低检出量为110 copies/μL,重复性结果变异系数均不高于2％.为评估SYBR Green荧光定量PCR检测方法的实用性,本研究将12只小鼠平均分为2组,其中试验组小鼠灌胃0.2 mL 109 CFU/mL B.thetaiotaomicron,对照组灌胃0.2 mL胨酵母浸膏葡萄糖(PYG)培养基,2周后,利用本研究建立的方法对小鼠粪便中细菌的全基因组DNA进行荧光定量PCR检测,结果显示试验组小鼠粪便样品中B.thetaiotaomicron含量高于对照组.以上结果表明,本研究建立的B.thetaiotaomicron SYBR Green荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可对动物肠道中的B.thetaiotaomicron含量进行检测.