沙拉沙星间接竞争化学发光酶联免疫检测方法的建立

为建立动物源性食品中沙拉沙星(SAR)残留的快速检测方法,本试验通过对盐酸沙拉沙星进行分子改造和偶联蛋白合成完全免疫原,免疫小鼠制备SAR单克隆抗体.通过棋盘法确定最佳包被原浓度及一抗稀释度,优化确定最佳反应条件,从而建立间接竞争化学发光酶联免疫(ic-CLEIA)检测方法,并通过灵敏度、精密度、交叉反应率、添加回收试验对该方法进行评价.紫外扫描结果显示,完全免疫原偶联成功;制备的SAR单克隆抗体效价达1 ∶ 4×106;包被原浓度为0.25 μg/mL,抗体稀释比为1:750 000,4℃包被过夜,5％脱脂乳封闭,竞争孵育1 h,酶标二抗稀释比为1:10 000,孵育1h为ic-CLEIA最佳反应条件;建立的ic-CLEIA方法标准曲线呈线性,线性范围为0.0625～10 ng/mL,R2=0.995,灵敏度IC50为1.45 ng/mL;其平均批内和批间变异系数均＜10％;除与二氟沙星的交叉反应率达到98.08％以外,与其他氟喹诺酮类药物的交叉反应率均＜8％,与其他非氟喹诺酮类药物均无交叉反应;SAR标准溶液的最低检测限(LOD)为0.32 ng/mL,SAR在鸡肉样品中的LOD为0.46 μg/kg;添加回收率在88.3％～106.7％范围内,其变异系数≤12.2％.结果表明,本研究建立的ic-CLEIA方法检测速度快、灵敏度高,适用于动物源性食品中SAR残留的大量检测,为SAR残留检测提供了新的方法.