广灵驴ADSL基因克隆、序列分析及组织表达研究

本研究旨在对广灵驴腺苷琥珀酸裂解酶(adenylo succinatelyase,ADSL)基因进行克隆及生物信息学分析,并检测其在不同组织中的表达情况,为探究A DSL基因在广灵驴肌苷酸合成及风味形成中的作用机制提供理论参考.根据GenBank中公布的马(登录号:XM 001917207.5)、牛(登录号:NM 001102377.2)、猪(登录号:GU249574.1)等物种的A DSL基因mRNA序列,通过Primer Premier 3.0在线工具设计同源引物,RT-PCR法扩增并克隆A DSL基因序列,对编码序列进行结构与功能分析,最后用实时荧光定量PCR检测A DSL基因在广灵驴心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌组织中的表达水平.结果 显示,广灵驴ADSL基因CDS长1473 bp,编码490个氨基酸,提交至NCBI,登录号:MW037837,其核苷酸序列与马、牛、双峰驼、猪、绵羊、人、小鼠的相似性分别为99.5％、90.8％、92.3％、90.4％、90.7％、90.5％和86.0％.进化树分析结果表明,广灵驴与马的种属关系最近,与小鼠的亲缘关系最远.ADSL蛋白分子质量为55.44 ku,等电点为6.52,平均疏水指数为-0.243,是一种不稳定的酸性亲水蛋白.ADSL蛋白有41个磷酸化修饰位点,6个糖基化修饰位点,没有信号肽和跨膜结构,有1个卷曲螺旋.ADSL蛋白主要定位在细胞质,α-螺旋(68.98％)是主要的二级结构.ADSL基因在广灵驴6个组织中都有表达,其中肺脏中的表达量最高,显著高于其他组织(P＜0.05),其次是心脏和肝脏,脾脏、肾脏和背最长肌中的表达量最低.本研究结果为今后探究A DSL基因在广灵驴肌苷酸合成及风味形成的分子机制奠定基础.