牛病毒性腹泻病毒E2蛋白与MDBK细胞互作蛋白的筛选

为了筛选与鉴定牛病毒性腹泻病毒(BVDV) E2蛋白与MDBK细胞的互作蛋白,以牛病毒性腹泻病毒BA株为模板,通过PCR扩增E2基因,构建重组质粒pFast-E2.将其转化至DH10Bac感受态细胞,再转染sf9昆虫细胞,获得P3代重组杆状病毒,在sf9细胞中表达E2蛋白,应用Western-blot进行鉴定,通过pull-down结合质谱技术筛选与鉴定BVDV E2蛋白与MDBK细胞互作的候选蛋白.结果 表明,PCR克隆获得的E2基因片段大小约为1047 bp;在st9昆虫细胞中能成功表达出分子质量约为43.6 ku的E2蛋白;筛选出8种候选互作蛋白,主要包括α-辅肌动蛋白(α-actinin)、延伸因子1-α(elongation factor 1-α)、波形蛋白(vimentin)和α葡萄糖苷酶Ⅱ(GANAB);通过GO分析可知,3种蛋白(P68103、E1B9F6、E1B7J1)具有GTP酶活性和结合GTP的功能,3种蛋白(A4ZZF8、Q3B7N2、P48616)具有结合双链RNA的功能,2种蛋白(Q3B7N2、A5D7D1)具有结合肌动蛋白丝的功能,2种蛋白(A4ZZF8、Q3B7N2)具有结合离子通道的功能和配体依赖性核受体转录共激活因子活性,2种蛋白(A5D7D1、A6QNJ8)具有结合mRNA的多聚腺苷酸尾部功能,1种蛋白(P48616)是细胞骨架的结构成分,且具有蛋白绑定功能.本研究为探索BVDV感染的分子机制以及治疗靶点筛选等研究提供了参考.