鉴别大肠杆菌O8/O9血清型双重PCR方法的建立

为了建立一种能鉴定大肠杆菌O8、O9血清型的高效、快速的双重PCR方法,参考GenBank中大肠杆菌O8、O9血清型的O抗原合成基因簇序列筛选特异性靶标基因并设计合成2对PCR引物,通过优化反应条件,分析双重PCR方法的特异性、敏感性,通过检测大肠杆菌临床分离株验证双重PCR的实用性.结果显示,所建立的双重PCR方法可有效鉴定O8、O9血清型大肠杆菌,对其他血清型大肠杆菌及菌株则无交叉反应,表明PCR方法的特异性好;O8和O9血清型的菌体最低检出限分别为1×103CFU/mL和1×104 CFU/mL,其DNA最低检出限分别为10 pg/μL和500 pg/μL.临床分离菌株检测显示,双重PCR检测结果与传统血清凝集结果一致.结果表明,本研究建立的双重PCR方法可有效、特异、灵敏、快速鉴定大肠杆菌O8、O9血清型,为大肠杆菌O8、O9血清型检测及其流行病学调查提供了新的技术手段.