基于禽偏肺病毒N蛋白的间接ELISA检测方法的建立和初步应用

为进一步了解我国鸡群禽偏肺病毒(aMPV)的感染情况,加强对aMPV的防控,应用RT-PCR方法扩增出aMPV N基因的保守片段并连入原核表达载体pET32a-l中,再转入Rosseta(DE3)细胞进行表达,表达的蛋白经纯化后作为包被抗原,经一系列条件优化,建立间接ELISA检测方法并进行初步应用.结果显示,成功表达且纯化了重组N蛋白,以此N蛋白建立的间接ELISA方法对新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、禽流感病毒(AIV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、白血病病毒(ALV)、马立克病病毒(MDV)等血清的检测结果为阴性;而阳性血清1∶3200稀释时仍检测为阳性结果;批内和批间重复性试验的最大变异系数均小于10％.应用建立的间接ELISA方法与商品化aMPV ELISA试剂盒对样品进行平行检测,阳性符合率为95.88％(256/267),阴性符合率为93.22％(55/59),总符合率为95.40％(311/326).应用本方法对广西地区7个种鸡场和6个肉鸡场的960份血清进行检测,结果,种鸡血清aMPV抗体阳性率为93.33％(784/840),肉鸡血清aMPV抗体阳性率为99.17％(119/120).本研究建立的间接ELISA方法为该病的早期诊断与流行病学调查提供了技术手段.