11S球蛋白通过核因子-κB、诱导型一氧化氮合酶、c-Jun N端激酶、p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路诱导猪小肠上皮细胞损伤的研究

本研究旨在利用细胞体外培养技术,分析11S球蛋白通过核因子-кB( NF-κB) 、诱导型一氧化氮合酶( iNOS) 、c-Jun N端激酶( JNK)和p38丝裂原活化蛋白激酶( p38 MAPK)信号通路诱导猪小肠上皮细胞( IPEC-J2细胞)损伤的作用差异.试验随机分为6组:A组(对照组)无添加;B组添加5 mg/mL的11S球蛋白;C、D、E和F组分别添加1 μmol/L的NF-κB抑制剂二硫氨基甲酸肽吡咯烷( PDTC) 、iNOS抑制剂Nω-硝基-L-精氨酸甲酯( L-NAME) 、JNK抑制剂SP600125和p38 MAPK抑制剂SB202190预处理后,分别添加5 mg/mL的11S球蛋白.培养24 h后,CCK-8检测细胞活性,酶联免疫吸附测定( ELISA)法检测一氧化氮( NO) 、肿瘤坏死因子-α( TNF-α) 、干扰素-γ( INF-γ)和白细胞介素-10( IL-10)含量,苏木精-伊红( HE)染色法观察细胞及细胞核形态,用透射电子显微镜观察细胞超微结构,实时荧光定量PCR检测NF-κB、iNOS、JNK、p38 MAPK mRNA相对表达量,Western blot检测NF-κB、iNOS、JNK、p38 MAPK蛋白表达水平.结果显示:1)与A组相比,B组细胞活性极显著降低( P＜0.01);与B组相比,C、D、E和F组细胞活性极显著升高(P＜0.01) ,且C组细胞活性显著高于D、E和F组( P＜0.05) .2)与A组相比,B 组 TNF-α、INF-γ和 NO 含量极显著升高( P＜0.01) ,IL-10 含量极显著降低( P＜0.01) ;与B组相比,C、D、E和F组TNF-α、INF-γ和NO含量极显著降低( P＜0.01) ,IL-10含量极显著升高( P＜0.01) . 3)与A组相比,B组NF-κB、iNOS、JNK和p38 MAPK蛋白表达水平和mRNA相对表达量极显著升高( P＜0.01) . 4)与B组相比,C和F组NF-κB、iNOS、JNK和p38 MAPK mRNA相对表达量显著或极显著降低( P＜0. 05 或 P＜0. 01) , D 组 NF-κB、 iNOS 和JNK mRNA相对表达量极显著降低( P＜0.01) ,E组NF-κB、JNK和p38 MAPK mRNA相对表达量显著或极显著降低(P＜0.05或P＜0.01). 5)与B组相比,C、E和F组NF-κB、iNOS、JNK和p38 MAPK蛋白表达水平极显著降低( P＜0.01) ,D组NF-κB、iNOS和JNK蛋白表达水平极显著降低( P＜0.01). 6) HE 染色及透射电镜观察可见,B组细胞损伤、胞质空泡化、核染色质聚集,C、D、E和F组细胞损伤受到抑制,且C组细胞结构形态的完整性优于D、E和F组.由此可见,11S球蛋白通过JNK/p38 MAPK/NF-κB/iNOS信号通路诱导IPEC-J2 细胞损伤,且NF-κB信号通路在诱导细胞损伤的过程中发挥关键作用.