牦牛SIRT7基因克隆及其在各组织和不同发情时期卵巢中的表达

旨在克隆牦牛Sirtuin7(SIRT7)基因,预测其蛋白结构和功能,并检测其mRNA在牦牛各组织和不同发情时期卵巢中的表达.采集成年牦牛(3～5岁)的肝脏、乳腺、大肠、肾等组织及处于卵泡期、红体期、黄体期的卵巢.提取各组织的总RNA,并通过反转录PCR(Reverse transcription PCR,RT-PCR)扩增获得牦牛SIRT7的基因序列.通过不同的生物信息学软件比对SIRT7基因的序列同源性、构建系统进化树以及预测牦牛SIRT7所编码蛋白的结构和功能.采用实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法检测SIRT7 mRNA在牦牛各组织和不同发情时期卵巢中的表达.结果显示,牦牛SIRT7基因的开放阅读框(Open reading frame,ORF)大小为1203 bp,编码400个氨基酸.牦牛SIRT7基因的核苷酸序列与黄牛、绵羊、山羊的同源性较高.SIRT7蛋白为亲水性蛋白.二级结构由α-螺旋(47.4％)、β-折叠(29.7％)、β-转角(15.7％)及无规卷曲(7.2％)组成.磷酸化和糖基化分析结果表明,SIRT7蛋白有38个磷酸化位点,24个O-糖基化位点.荧光定量结果为,SIRT7 mRNA在牦牛的肾中表达最高.在牦牛卵巢中,卵泡期、红体期、黄体期SIRT7 mRNA的表达量呈持续升高的趋势,其中黄体期表达量最高.为揭示SIRT7在牦牛生长发育,尤其是卵巢发育过程中的调控作用提供一定的基础数据.