肝片吸虫天冬酰胺内肽酶的分子特征、遗传进化及抗原特性研究

[目的]分析肝片吸虫Legumain蛋白的分子特征、遗传进化及抗原性,评估其作为诊断抗原的潜力.[方法]根据GenBank中已发表的肝片吸虫(Fh)Legumain基因序列设计特异性引物,以Fh总RNA为模板,进行RT-PCR扩增,并将扩增产物克隆到pMD19-T载体中测序,分析其分子特征.将Legumain基因克隆入表达载体pET-32a(+)中,将其转化至Escherichia coli感受态细胞Transetta(DE3)中,IPTG诱导表达并获得纯化的重组蛋白Legumain,进行抗原性分析.[结果]Fh Legumain基因cDNA全长1278 bp,编码425个氨基酸,编码蛋白分子的优势抗原表位主要集中在第73～103、115～137、254～308、319～337、360～375位;1～21位有信号肽,无跨膜区,为亲水性蛋白.[结论]经SDS-PAGE检测,重组Legumain蛋白分子量约为65 kDa,与预期大小相符;Western blot分析表明,重组Legumain可被感染肝片吸虫的绵羊阳性血清特异性识别,证明具有良好的反应原性.小鼠免疫试验证实该蛋白具有良好的免疫原性.