酸面团中微生物基因组DNA提取方法的优化

为有效提高酸面团中微生物基因组DNA的提取纯度与浓度,采用改良的CTAB法、STES法以及两种不同的基因组DNA提取试剂盒对酸面团中微生物基因组DNA进行了提取,并且重点优化了酸面团样品的前处理方法,经分光光度法和电泳法检测,确定了采用不同方法所获得DNA产物的浓度与纯度.结果表明:离心沉淀法、洗去面筋法和烘干法3种前处理方法中,离心沉淀法更有利于酸面团中微生物基因组DNA的提取;CTAB法和STES法所提取的基因组DNA纯度较低(D(260)/D(280)>1.9),片段略小,存在RNA污染情况,作为模板扩增基因组中的16S rRNA基因时产物中的杂带较多;快速DNA提取检测试剂盒法所提取的DNA纯度低(D(260)/D(280)<1.7),蛋白质及酚类物质含量较高,作为模板进行16S rRNA基因的PCR扩增时并未获得目的条带,故不适合酸面团中微生物基因组DNA的提取;通用基因组DNA提取试剂盒法所提取的基因组DNA完整性较好,纯度较高,5 g酸面团样品中所提取的基因组DNA浓度达到80.10 ng/μg,D(260)/D(280)为1.80,且进行PCR扩增时产物的杂带较少、亮度较高,是较为适合酸面团中微生物基因组DNA的提取方法.