高脂对骨骼肌细胞miR-27a、生物钟基因及胰岛素敏感性的影响

目的 观察高脂对骨骼肌细胞miR-27a及生物钟基因的影响,探讨miR-27a及生物钟基因在高脂介导的骨骼肌胰岛素抵抗(IR)中的作用.方法 体外培养小鼠C2C12骨骼肌成肌细胞并诱导分化成肌管,采用免疫荧光技术检测成熟肌管标记基因即成肌细胞决定基因1(MyoD1)表达,在C2 C12细胞分化为肌管细胞后分为棕榈酸干预组(PA组,0.75 mmol·L-1)和对照组(Con组),以Western blot法检测骨骼肌细胞p-Akt/Akt蛋白表达情况,采用葡萄糖氧化酶法检测细胞培养液中葡萄糖的变化来观察骨骼肌胰岛素敏感性的变化,以实时荧光定量PCR技术检测棕榈酸对miR-27a及生物钟基因表达的影响.结果 分化前肌管形成标志蛋白MyoD1未表达,分化后MyoD1表达明显.PA组p-Akt/Akt蛋白表达水平及葡萄糖消耗较对照组低(P<0.001).PA组生物钟核心基因Clock mRNA及Bmal1 mRNA表达水平较对照组低,miR-27a表达水平较对照组高(P<0.05),且miR-27a与Clock mRNA及Bmal1 mRNA呈负相关(r=-0.847、-0.662,P<0.05).结论 棕榈酸干预导致骨骼肌C2C12细胞昼夜节律紊乱及IR,这种作用可能是通过miR-27a介导的.