CCR5 siRNA对类风湿关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的影响

目的:利用小分子干扰RNA(siRNA)抑制CC趋化因子受体5(CCR5)的表达,以探讨CCR5 siRNA对类风湿关节炎(RA)大鼠滑膜细胞凋亡的影响及其可能的机制.方法:采用胶原诱导法构建RA大鼠模型,分离和培养RA大鼠滑膜细胞,并将细胞分为4组:RA组(RA大鼠滑膜细胞)、RA+ NC组(加入脂质体包裹的NC siRNA)、RA+ mock组(加入脂质体)、RA+siRNA组(加入脂质体包裹的CCR5 siRNA).通过Lipofectamine 2000将CCR5 siRNA和NC siRNA载体转染入滑膜细胞;利用RNA干扰技术抑制大鼠滑膜细胞CCR5的表达后,再用qRT-PCR和Western Blot检测各组滑膜细胞CCR5、细胞凋亡相关基因[促凋亡Bcl-2相关X蛋白(Bax)、抗凋亡蛋白(Bcl-2)、Caspase-3(Cas3)]mRNA和蛋白表达情况;Annexin V-PI双染检测滑膜细胞的凋亡.结果:与RA组比较,RA+ siRNA组CCR5、Bcl-2 mRNA和蛋白水平显著下降,Bax、Cas3 mRNA和蛋白水平明显上升,滑膜细胞凋亡率明显升高(均P＜0.05),而RA+NC组、RA+ mock组无明显变化.结论:CCR5 siRNA可抑制CCR5的表达,还可能通过上调Bax、Cas3水平及抑制Bcl-2的表达促进滑膜细胞的凋亡.