Establishment and application of a multiplex PCR assay for four pathogens in laboratory animals

【摘要】 目的 建立快速检测多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、支原体和肺炎克雷伯杆菌 4 种实验动物病原 体的多重 PCR 方法。 方法 根据 GenBank 基因设计出特异性引物;经过多重 PCR 的优化,特异性和敏感性的检 测,建立多重 PCR 体系。 应用该 PCR 体系检测人工感染样本和实验动物的气管分泌物,并与传统方法做对比。 结果 多重 PCR 扩增出多杀巴氏杆菌(356 bp)、支气管鲍特杆菌(237 bp)、支原体(266 bp)和肺炎克雷伯杆菌 (142 bp)的目的条带。 肺炎克雷伯杆菌敏感性为 10 pg,多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、支原体敏感性为 1 pg,特 异性检测未从其他病原菌中检测出目的条带。 应用建立的多重 PCR 体系检测人工感染样本的不同组合,45 只实 验动物气管检测出 15 只多杀巴氏杆菌阳性,9 只肺支原体阳性,但传统培养方法和血清学方法未检测出阳性标本。 结论 本文建立的多重 PCR 方法操作简单、快速、特异性强、灵敏度高,能够实现对多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆 菌、支原体和肺炎克雷伯杆菌 4 种实验动物病原体的快速检测。 【关键词】 多杀巴氏杆菌;支气管鲍特杆菌;支原体;肺炎克雷伯杆菌;多重 PCR 【中图分类号】 R⁃33 【文献标识码】 A 【文章编号】1671⁃7856(2017) 08⁃0080⁃05 doi: 10􀆰 3969. j. issn. 1671 7856􀆰 2017􀆰 08􀆰 016