C57BL/6J小鼠衰老耳蜗血管纹微血管周细胞对内皮细胞通透性影响的研究

目的:研究小鼠衰老耳蜗血迷路屏障通透性的变化，并通过建立内皮细胞（endothelial cells，EC）系和周细胞（pericytes，PC）系非接触式共培养模型，进一步探讨耳蜗血管纹微血管PC对EC通透性的影响。方法:C57BL/6J小鼠分为2组：3月龄为年轻组，12月龄为衰老组；细胞实验分为4组：EC组、EC+PC共培养组、D-半乳糖（D-gal）+EC组和D-gal+EC+PC共培养组。听性脑干反应（auditory brain response，ABR）检测2组小鼠听觉功能；伊文思蓝（evans blue）染色检测2组小鼠耳蜗血迷路屏障的通透性；透射电镜观察2组小鼠血迷路屏障EC、PC和紧密连接结构；免疫荧光检测2组小鼠耳蜗血管纹上紧密连接蛋白表达水平；Transwell小室检测EC通透性；Western blot及免疫荧光技术检测EC上紧密连接蛋白的表达水平。以SPSS 20.0软件进行统计学分析。结果:与年轻组相比，衰老组小鼠ABR阈值明显升高且Ⅰ波潜伏期延长（ t=10.25， P<0.01； t=5.61， P<0.05）、耳蜗血迷路屏障通透性升高且血管纹上紧密连接蛋白的表达降低（ P值均<0.05）；耳蜗超微结构显示衰老小鼠耳蜗血管纹微血管管腔变形、基底膜增厚、内皮间紧密连接间隙增大；原代培养的EC和PC阳性率达95%以上；并确定15 g/L D-gal诱导的细胞为衰老细胞；与EC组相比，D-gal+EC组EC的紧密连接蛋白表达降低（ t=7.42， P<0.01； t=13.19， P<0.05），通透性增加（ t=11.17， P<0.01）；在共培养组中，EC+PC共培养组和D-gal+EC+PC共培养组EC间紧密连接蛋白表达均增加，通透性均降低。 结论:衰老小鼠耳蜗血迷路屏障的通透性升高，紧密连接蛋白水平降低；衰老状态下，耳蜗血管纹微血管PC可能通过调节紧密连接蛋白的表达进而影响EC通透性。