尼罗罗非鱼TNF-R1和TNF-R2基因克隆及表达

为揭示TNF-α受体基因TNF-R1和TNF-R2在尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)免疫过程的作用,本研究利用RACE技术获得了TNF-R1和TNF-R2的cDNA.结果 表明,TNF-R1 cDNA全长2 275 bp,ORF区1 335bp,编码444个氨基酸;TNF-R2 cDNA全长l 719 bp,ORF区1 476 bp,编码491个氨基酸.TNF-R1含3个富含半胱氨酸结构域(cysteine-rich domain,CRD)和一个死亡结构域(death domain,DD),而TNF-R2有4个CRD,缺少DD.系统进化分析表明:其TNF-R1和TNF-R2分别与其他脊椎动物TNF-R1和TNF-R2基因同源性很高,在进化树中TNF-R1、TNF-R2各自聚类且两者之间分支明显.实时荧光定量PCR结果表明:TNF-R1和TNF-R2在该鱼体的不同组织中均有表达,其中在鳃、头肾和脾脏中表达水平最高,而在肌肉、垂体中表达量低.用脂多糖(LPS)和多聚肌苷酸-胞苷酸(Poly I: C)分别刺激离体孵育的该鱼头肾和脾脏白细胞可不同程度上调TNF-α、TNF-R1和TNF-R2的表达.无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染该鱼可显著上调头肾和脾脏中3种基因的表达.本研究对揭示TNF-R1和TNF-R2免疫调控机制,提高罗非鱼健康养殖水平具有一定参考价值.