Neuritin原核表达载体构建及高表达菌株筛选

目的 构建带有肠激酶序列的pET32a-neuritin重组质粒,为后期酶切去除重组蛋白His标签奠定基础,并筛选高表达菌株.方法 利用基因工程技术在pET32a载体自身His标签和肠激酶序列之后克隆插入neuritin基因.首先PCR扩增目的基因neuritin,与原核表达载体pET32a重组后,重组质粒转化DH5α 感受态,采用菌落PCR、双酶切鉴定,并将鉴定阳性的重组质粒转化BL21感受态后,测序鉴定.阳性转化子经IPTG诱导表达蛋白后,SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白.对50个阳性转化子的表达产物经SDS-PAGE鉴定其表达水平.结果 菌落PCR、双酶切鉴定结果与预期相符,且测序结果比对正确.蛋白诱导表达后SDS-PAGE和Western blot结果证实是Neuritin蛋白.SDS-PAGE鉴定高表达菌株蛋白表达量,筛选出1株高表达菌株.结论 本研究成功构建带有肠激酶序列的pET32a-neuritin重组质粒,并获得高表达Neuritin蛋白菌株,为后期获得无标签重组Neuritin蛋白奠定基础.