八肋游仆虫ARF1蛋白的表达纯化及其与嘌呤核苷酸的相互作用

Xuemei ZHAO,Jianying SONG,Xi WANG,Ruanlin WANG,Binsheng YANG,Aihua LIANG

Journal of Shanxi University(Natural Science Edition)（2017）

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摘要

ADP核糖基化因子1(ARF1)是Ras超家族的成员,调控细胞内囊泡运输,进而影响细胞的生长发育.为了研究单细胞真核生物八肋游仆虫ARF1的功能,构建了重组表达质粒pET28a-ARF1,在大肠杆菌BL21中进行了表达纯化,获得高纯度的八肋游仆虫腺苷酸核糖基化因子1蛋白EoARF1,随后通过荧光光谱法检测了其与嘌呤核苷酸的相互作用.结果表明,表达纯化的EoARF1蛋白能与嘌呤核苷酸发生相互作用,其结合位点数n约等于1,且与鸟嘌呤核苷酸作用强弱顺序为GTP＞ GDP＞ GMP,与GDP的结合强度明显大于与ADP的结合强度.

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关键词

ADP ribosylation factor 1,Euplotes octocarinatus,expression and purification,fluorescent spectrometry

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