基于克隆测序技术的人类白细胞抗原基因高分辨率分型方法的建立

运用优化的扩增和克隆测序技术，建立了人类白细胞抗原( HLA-B)基因的高分辨率分型方法。针对HLA-B基因保守区序列设计引物进行等位基因扩增，基于质粒不相容原理将杂合型等位基因有效克隆入质粒DNA中，经细菌培养后进行Sanger测序，根据测序结果经ClustalX2软件分析和IMTG/HLA数据库的BLAST比对即可完成HLA-B基因的高分辨率分型。利用建立的方法对7例临床样本进行了HLA-B基因分型，并且与第三方直接碱基序列分析基因分型技术( PCR-SBT)进行比对，结果完全一致。本方法无需专业分型软件，准确度高，成本低；采用通用引物进行等位基因的扩增和测序，无需传统方法中繁琐的引物设计和过程优化，实现了HLA-B基因的高分辨率分型。