异源表达N-端融合eYFP标签的GAAPs增强拟南芥对ER胁迫敏感性

高尔基体抗凋亡蛋白GAAPs (Golgi anti-apoptotic proteins)在真核生物中高度保守,是动物细胞中抑制胁迫诱导凋亡的BAX inhibitor-1类因子.反向遗传学研究表明,拟南芥GAAPs也能够抑制ER胁迫诱导的细胞死亡.为进一步在蛋白质水平研究GAAPs的功能和作用机制,通常使用基因融合标签的表达转化植株,但要考虑所使用的标签是否影响蛋白的功能.为此,我们分别构建了GAAP1和GAAP4的N末端融合eYFP、无eYFP标签的拟南芥过量表达转化子.通过检测eYFP-GAAP1/GAAP4以及gaap1突变体对ER胁迫敏感性,发现eYFPGAAP1/GAAP4过量表达与gaap1突变体类似,ER胁迫下的存活率降低,细胞死亡增强.定量PCR分析表明eYFPGAAP1过量表达抑制急性或长期ER胁迫下未折叠蛋白响应(unfolded protein response, UPR)通路相关基因的表达.这些结果表明GAAPs的N-端融合eYFP标签影响其在ER胁迫抗性以及抗细胞死亡中的功能.