狂犬病病毒TaqMan qRT-PCR检测方法的建立
Chinese Journal of Virology（2018）
摘要
建立狂犬病病毒TaqMan qRT-PCR检测方法,并进行评价和初步应用.针对狂犬病病毒L基因保守区域设计特异性引物、探针,建立PCR反应体系并评价检测体系的扩增效率、灵敏度、特异性和准确性等指标,灵敏度评价结果与现有巢式RT-PCR和基于N基因qRT-PCR检测方法相比较.结果显示本研究建立的基于L基因qRT-PCR检测体系扩增效率高于90％;最小检测病毒滴度为2.7×10-3FFU/mL,灵敏度高于基于N基因qRT-PCR和巢式RT-PCR 100倍;最小检测核酸拷贝数为100拷贝,建立了基于目的基因RNA标准品的标准曲线,可用于定量检测;对于我国的狂犬病病毒流行毒株检测范围较广,动物样本检测结果与金标准DFA检测结果相一致,准确性较高.本研究建立的狂犬病病毒qRT-PCR可用于狂犬病病毒实验室检测.
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