复方健耳剂对抗老年性耳蜗神经细胞凋亡超微结构观察及上调NeuN和BDNF定位表达作用

目的 利用透射电镜观察中药复方健耳剂干预小鼠老年性耳蜗外毛细胞( outer hair cell,OHC)、螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons,SGN)凋亡作用;共聚焦显微镜,结合形态学多重免疫荧光技术,观察复方健耳剂对耳蜗SGN的特异性核抗原蛋白(NeuN)、脑源性神经营养因子( BDNF)定位表达影响作用,探讨其作用机制.方法 选择1月龄C57BL/6J小鼠22只并随机分为两组,其中11只小鼠每日饮用自来水直到7个月作为老年性耳蜗退变对照组(简称7月龄对照组);11只小鼠每日饮用复方健耳剂1. 83 g/( kg·d)直到7个月作为中药干预组(简称7月龄中药组).所有动物期满取出耳蜗,制备石蜡包埋切片,在透射电镜下,重点选择观察7月龄对照组耳蜗底回存留尚未解体的OHC以及对应部位的SGN超微结构变化,同时与7月龄中药组相同部位的OHC和SGN进行对照.利用激光共聚焦显微镜,结合形态学多重免疫荧光技术,观察NeuN与BDNF在SGN定位表达,并进行统计分析.结果 7月龄对照组耳蜗底回存留尚未解体的OHC以及对应部位的SGN,胞体萎缩,胞核不整,核染色质聚集成团、边集,纹理结构模糊,电子密度高,尤其是SGN大小形态不一,数量明显减少,甚至核染色质溶解,形成空泡,或解体缺如等,呈现严重凋亡状况.而7月龄中药组耳蜗底回OHC或SGN凋亡状况不明显,细胞形态结构较完整,数量较多,核染色质分布较均匀,纹理结构清晰,电子密度低,仅个别胞核溶解,形成空泡.与7月龄对照组比较,7 月龄中药组耳蜗底回 SGN 中的 NeuN 与 BDNF 定位表达密度较高,数量较多( P＜ 0. 05).结论耳蜗OHC或SGN细胞核超微结构改变、NeuN表达减少是老年性耳蜗神经细胞凋亡的重要特征;同期SGN凋亡早于OHC;中药复方健耳剂具有明显对抗OHC或SGN超微结构改变,其对SGN中的NeuN表达明显增多,提示中药具有明显保护SGN作用,与透射电镜观察一致,其作用机制与促进BDNF表达,从而发挥系列生物学效应有关.