家蚕凋亡蛋白抑制因子(BmIAP)基因真核表达与功能分析

[目的]家蚕Bombyx mori凋亡蛋白抑制因子(BmIAP)是在家蚕中发现的一个凋亡蛋白抑制因子(IAP).本研究旨在验证家蚕BmIAP蛋白在家蚕细胞内的功能特征,以进一步研究BmIAP在家蚕细胞凋亡中的作用.[方法]对构建的瞬时表达载体PIZ/V5-BmIAP-dsRed,应用脂质体转染家蚕BmN-SWU1细胞;应用实时荧光定量PCR和Western blot分析BmIAP mRNA及蛋白表达水平;通过150 ng/mL放线菌素D诱导家蚕BmN-SWU1细胞12,18和24 h,应用免疫荧光及实时荧光定量PCR方法,分析BmIAP瞬时表达与细胞凋亡的关系.[结果]构建的瞬时表达载体PIZ/V5-BmIAP-dsRed能在家蚕BmN-SWU1细胞表达BmIAP蛋白,其BmIAP mRNA表达水平上调近45倍,融合蛋白约为60 kD;BmIAP基因瞬时表达72 h后,BmIAP能显著抑制放线菌素D诱导12 h时的家蚕BmN-SWU1细胞凋亡.[结论]BmIAP蛋白在家蚕细胞中能抑制家蚕细胞凋亡,是家蚕的一种凋亡蛋白抑制因子.