松材线虫galectin-1基因的克隆、原核表达和表达模式分析

[目的]galectin-1是凝集素的一种,广泛存在于各种生物体内,在生长发育、免疫调节方面起重要作用.本研究克隆和表达了松材线虫的galectin-1蛋白,并分析了各个龄期的表达量.[方法]设计引物,扩增松材线虫的galectin-1基因,使用双酶切的方法连接pET-28a载体和目的基因,转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆;在不同温度下,用不同浓度的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,Western blot检验蛋白表达情况;采用RT-PCR技术检验松材线虫各个龄期galectin-1基因的表达情况.[结果]由SMART和PredictProtein软件分析可知,该蛋白有2个结构域,并且主要由无规卷曲和β折叠构成;生物学信息分析显示,松材线虫的galectin-1与小卷蛾斯氏线虫的相似性更高;与日本血吸虫相比,线虫能很好地聚集在一个分支上.Western blot检测纯化蛋白大小与查询所得蛋白分子质量一致.RT-qPCR结果显示,以繁殖型2龄松材线虫(L2)为对照,galectin-1基因在繁殖型3龄(L3)、繁殖型4龄(L4)、扩散型3龄(LⅢ)和扩散型4龄(LⅣ)松材线虫中的表达量高,尤其是在LⅢ中的表达量最高;雌雄成虫没有显著性差异.[结论]松材线虫的galectin-1基因在pET-28a原核表达系统中呈可溶性表达,在不同龄期的表达量有差异.本研究为进一步研究松材线虫的galectin-1基因奠定了基础,为松材线虫的防治提供了新的方向.