不动杆菌3-苯氧基苯甲酸降解基因的克隆与表达

3-苯氧基苯甲酸(3-PBA)作为拟除虫菊酯类农药的非特异性降解中间产物，具有抗雌激素特性，可扰乱生物体内分泌系统，比菊酯类农药迁移更广，半衰期更长，生物毒性更大，是拟除虫菊酯类农药在生物体中暴露的标志。通过构建4-D菌(Acinetobacter sp.)基因组文库，混合池驯化筛选得到4-D 菌中降解3-PBA 的关键酶基因，其开放阅读框为921 bp，编码306个氨基酸，Genbank登录号为KR024742。经同源比对和酶活验证，证实该酶为邻苯二酚双加氧酶。根据该ORF序列设计引物，引物两端分别加上NdeⅠ和Hind Ⅲ酶切位点，以4-D菌基因组DNA为模板，成功克隆到D34基因序列。构建表达载体pET-21b-D34并转化进宿主大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG(0.1 mmol/L)诱导后，表达重组菌对3-PBA降解率为18.7％。研究结果为3-PBA污染的微生物环境修复提供了理论参考。