家蚕质多角体病毒RDRP基因的克隆、表达及定位

应用分段RT-PCR的方法从家蚕质多角体病毒(Bombyxmori cytoplasmicpolyhedrosis virus,BmCPV)中国株的dsR-NA中成功地克隆了RDRP基因(RNA-dependent RNA polymerase),基因序列全长3 691bp,并登录GenBank,序列号为AY496445.利用质粒载体pET-28b成功地构建了表达质粒pET28b-RDRP,并用IPTG诱导的方法在大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(DE3)中获得表达,分子量约为138 kD.以重组蛋白的兔抗为一抗,15nm山羊抗兔IgG-胶体金为二抗,进行免疫标记,电镜定位,结果显示在病蚕中肠的柱状细胞的游离病毒粒子和多角体内的病毒粒子上均能结合胶体金颗粒,标记率为35%左右,证明BmCPV病毒的RDRP复合物确实位于病毒衣壳上.