干扰PGI调控HIF-1α的表达以及促进乳腺癌细胞凋亡

本实验探究乳腺癌MF-7细胞中干扰PGI的表达对HIF-1α的调控以及对细胞凋亡的影响.首先,使用慢病毒质粒转染构建干扰PGI (PGI-siRNA)的稳转细胞株,然后使用Hoechst33258染色和流式细胞术(FCM)检测细胞的凋亡,随后,采用RT-PCR检测PGI、HIF-1α和LDHA基因的表达,Western blotting检测Bcl-2、Bax、PGI、LDHA、HIF-1α和ERK蛋白的表达.成功构建PGI-siRNA的MCF-7稳转细胞株后,Hoechst33258染色实验结果显示,PGI-siRNA稳转细胞株中出现核固缩、染色质凝集等形态学改变,FCM结果亦表明PGI-siRNA稳转细胞株发生细胞凋亡.RT-PCR结果显示,PGI-siRNA稳转细胞株中PGI、LDHA和HIF-1α基因表达下调;Western blotting结果显示,PGI-siRNA稳转细胞株中LDHA、HIF-1α、ERK和Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调.以上实验结果表明:在乳腺癌MCF-7细胞中,干扰PGI可抑制HIF-1α的表达,同时促进MCF-7细胞凋亡.