一种具有CaPi矿化外壳的新型肺炎链球菌减毒活疫苗的构建

为构建肺炎链球菌减毒活疫苗SPY1矿化菌,并进一步探究其自身稳定性、热稳定性等生物学特性的改变,本研究以肺炎链球菌D39基因组DNA为模板设计合成构建突变体lytA基因所需引物,采用插入失活的方法构建SPY1-△lytA突变株,并以缺陷菌的生长特性以及PCR的方法进行鉴定;将SPY1-△ lytA突变株于富钙环境中培养,用不同浓度的磷酸盐进行滴定,使其形成磷酸钙矿化壳,通过扫描电镜以及直接荧光反应来检测疫苗菌株矿化情况;并将矿化菌株与未矿化菌株同时置于37℃不同时间后通过比较其存活率来评价矿化菌的热稳定性.PCR结果以及细菌长时间不溶解的生长特性表明成功构建了SPY1-△lytA突变株;扫描电镜以及直接荧光反应结果显示细菌表面形成CaPi矿化外壳,并且SPY1-△lytA-CaPi矿化菌具有较好的热稳定性.本研究为肺炎链球菌活菌疫苗的进一步研发奠定了基础.