小鼠节律基因 clock，bmal13′UTR 重组质粒构建与应用

为探讨miRNA与节律基因的相互作用，首先通过NCBI查找小鼠节律基因clock， bmal13′UTR序列，PCR扩增节律基因clock， bmal13′UTR全长后将目的片段定向克隆到PGL3－promoter质粒上并测序验证，构建节律基因clock，bmal13′UTR重组质粒。然后通过TargetScan软件预测可能与clock， bmal13′UTR相互作用的miRNAs，利用脂质体将miRNA模拟物与重组质粒共转293T细胞进行荧光活性检测，初步分析可能调控clock， bmal1表达的miRNAs。结果显示，采用RVP4引物进行的重组质粒反向测序结果与NCBI上查找的序列反向互补，成功构建小鼠节律基因clock， bmal13′UTR重组质粒，为进一步研究节律基因转录后调控机制奠定基础。 miR－199a－5p（P＜0．05）与miR－142－3p （P＜0．01）下调重组质粒活性约33％和45％，初步证实miR－199a－5p能够与clock 3′UTR，miR－142－3p能够与bmal13′UTR作用调控基因转录活性。