miR-145通过下调PLCε抑制膀胱癌EMT和迁移及其机制研究

目的:探讨miR-145调控PLCe对膀胱癌细胞T24上皮间质转化(EMT)和迁移的影响及可能的分子机制.方法:①腺病毒感染T24细胞,划痕实验和Transwell检测细胞的迁移能力;RT-PCR、Western blot分别检测PLCε及EMT相关分子的表达;为探究其分子机制,Western blot检测GSK-3β磷酸化(Ser9位点)和Snail的表达情况.②利用生物信息学技术预测可能调控PLCe的miRNA,结合文献报道的膀胱癌microRNA表达谱结果筛选出miR-145;转染miR-145 mimics至T24,qPCR检测miR-145、PLCε的表达,Western blot检测PLCε的表达.③转染miR-145 mimics,Western blot检测EMT相关分子及p-GSK-3β、Snail;划痕实验、Transwell检测过表达miR-145后细胞的迁移能力.结果:①干扰PLCε表达能显著抑制细胞的迁移,同时,使T24细胞中E-cadherin表达上调,N-cadherin和Vimentin表达下调;干扰PLCe后,GSK-3β磷酸化(Ser9位点)水平下降,Snail表达降低.②转染miR-145 mimics可使T24细胞中miR-145表达增高,且明显抑制T24细胞中PLCε的表达.③在T24中过表达miR-145,细胞迁移能力显著下降,EMT标志分子的表达情况与沉默PLCε结果一致.同时,与阴性对照组相比,转染miR-145 mimics组p-GSK-3β和Snail表达显著减少.结论:PLCε通过GSK-3β/Snail信号通路促进膀胱癌细胞T24发生EMT及迁移,miR-145可以逆转PLCε诱导膀胱癌EMT的发生,从而阻止膀胱癌细胞的迁移.