猫杯状病毒2280株反向遗传系统的构建
Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine（2017）
摘要
为构建猫杯状病毒(FCV)2280株感染性克隆,本研究在FCV 2280株基因组5'末端和3'末端分别引入T7 RNA聚合酶启动子和丁型肝炎核酶(HdvRz)序列;并将FCV基因组中唯一的Ⅰ限制性酶切位点序列进行同义突变作为遗传标记;将基因组分为3段分别进行RT-PCR扩增,通过酶切依次克隆于pOK-12载体中,构建FCV基因组全长cDNA重组质粒.以其为模板经体外转录制备其全长基因组RNA,并在5'末端加帽,转染CRFK细胞,24 h后出现典型的细胞病变.提取出现细胞病变的病毒液的总RNA制备cDNA模板,PCR扩增FCV遗传标记片段并进行Ⅰ酶切鉴定分析,表明拯救的病毒为FCV重组病毒.而且拯救的病毒生长动力学与亲本病毒无明显差异.本实验为进一步研究FCV的生物学特性和致病机制奠定了基础.
更多查看译文
AI 理解论文
溯源树
样例
生成溯源树，研究论文发展脉络
Chat Paper
正在生成论文摘要